可见分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸、蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。基本原理:分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后,发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。它是带状光谱,反映了分子中某些基团的信息,可以用标准光谱图再结合其它手段进行定性分析。朗伯-比尔定律:当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时,溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比,即A=kcl式中比例常数k与吸光物质的本性,入射光波长及温度等因素有关。c为吸光物质浓度,l为透光液层厚度。
可见分光光度计正常工作的环境要求如下:
(1)避开高温高湿环境。请不要将仪器安装在高温高湿的环境下。仪器必须在5℃~35℃度温度、≤85%的湿度条件下安装使用。
(2)避免仪器受外界磁场干扰。请尽量远离发出磁场、电场、高频波的电器装置。
(3)远离腐蚀气体。请不要将仪器安装在空气中氯气、盐酸气体、硫化氢气体、亚硫酸气体等腐蚀性气体超标场所。
(4)仪器应放置在稳定的工作台上。放置仪器的工作台应水平、稳定、不能有振动;仪器的风扇附近应留有足够的空间,使其排风顺畅。
(5)不要与其他用电设备共用电源插座。请为仪器单独设计一个电源插座,不要与其它用电设备共用,电源应具备保护地线。
(6)不要将仪器放置在阳光直接照射的地方。
(7)避免灰尘多环境。
可见分光光度计的使用方法:
1、在接通电源之前,电表的指针必须位于“0”刻线上,否则应旋动电表上的校正螺丝调节到位。
2、打开比色皿室的箱盖和电源开关,使光电管在无光照射的情况下预热15分钟以上。
3、旋转波长调节器,选择测定所需的单色光波长。选择适当的灵敏度,一般先将灵敏度旋钮至中间位置,用零点调节器调节电表指针至T值为0%处。若不能调到,应适当增加灵敏度。
4、放入空白溶液和待测溶液,使空白溶液置于光路中,盖上比色皿室箱盖,使光电管受光,调节光量调节旋钮使电表指针在T值为100%处。
5、打开比色皿室箱盖(关闭光门),调节零点调节旋钮使针在T值为0%处,然后盖上箱盖(打开光门),调节光量调节旋钮使指针在T值为100%处。如此反复调节,直到关闭光t0=ITI门进和打开光门时指针分别指在T值为0%和100%处为止。
6、将待测溶液置于光路中,盖上箱盖,由此时指针的位置读得待测溶液的T值或A值。
7、测量完毕后,关闭开关取下电源插头,取出比色皿洗净擦干,放好。盖好比色皿暗箱,盖好仪器。