分光光度法在优化发芽黑小麦富集γ-氨基丁酸培养组分中的应用

材料与方法

1、材料

运黑161、GABA标准品

2、仪器与设备

高速离心机、恒温培养箱、真空冷冻干燥机、上海元析UV-9000S紫外可见分光光度计

实验部分

1、黑小麦芽的制备

挑选籽粒饱满、无蛀虫、无霉烂的“运黑161"，分别称取25.0±0.01g该黑小麦种子于100ml烧杯中。用自制微酸性电解水（pH5.55、有效氯浓度22.4mg/L）对种子浸泡消毒1h。用相应培养液以料液比1:2对种子浸泡8h，将浸泡后的种子均匀平铺在底部有孔的发芽盒中，于恒温箱（20℃）进行避光培养。培养期间每天用相应培养液淋浇3次，对照组用等量去离子水淋浇，培养5天后进行采收。

2、培养液成分对黑小麦芽GABA含量的影响

2.1培养液制备

配置质量浓度分别为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mg/mL谷氨suan钠溶液，浓度分别为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mmol/L氯化钙溶液，浓度分别为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mmol/L磷酸吡哆醛溶液，浓度分别为5、50、100、150、200、250mmol/L氯化钠溶液。采收后的黑小麦芽速冻后于真空冷冻干燥机中进行冻干，磨成粉状后于4℃冰箱贮存备用。

2.2标准曲线建立

配置不同浓度的GABA标准溶液，各取1ml，分别加入0.60ml 0.20mol/L硼酸盐缓冲液，摇匀后加入2mL5%苯fen溶液，摇匀，加入1mL7%次氯酸钠溶液混匀，用沸水加热5min，直到溶液变为蓝绿色，将其放入碎冰中冷却至室温。用紫外分光光度计在645nm处测定吸光度并绘制标准曲线。

2.3样品GABA含量的测定

准确称取0.50g黑小麦芽粉样品，加5mL蒸馏水，在往复振荡器震荡提取4h，上层清液于10000r/min离心3min。用移液枪取1mL上层清液于10mL容量瓶中，按测定标准品的方法在光度计波长645nm处测定样品中GABA含量。

实验结果

1、谷氨suan钠浓度对发芽黑小麦GABA含量的影响

图1 谷氨suan钠浓度对发芽黑小麦GABA含量的影响

2、氯化钙浓度对发芽黑小麦GABA含量的影响

图2 氯化钙浓度对发芽黑小麦GABA含量的影响

3、磷酸吡哆醛浓度对发芽黑小麦GABA含量的影响

图3 磷酸吡哆醛浓度对发芽黑小麦GABA含量的影响

4、氯化钠浓度对发芽黑小麦GABA含量的影响

图4 氯化钠浓度对发芽黑小麦GABA含量的影响

结论

试验以“运黑161"为原料，经微酸性电解水浸泡处理，将谷氨suan钠、磷酸吡哆醛、氯化钙、氯化钠溶液作为发芽黑小麦富集GABA培养液。用分光光度法测得的实验结果表明，增加底物浓度，激发谷氨suan脱羧酶活力，使黑小麦发芽处于盐胁迫环境等方法提高黑小麦芽GABA含量。